产品货号：
MT0002
中文名称：
全血microRNA提取试剂盒
英文名称：
miR-Quant microRNA Extraction Kit From Blood
产品规格：
25T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒适用于冻存和新鲜的抗凝全血样本中提取血液中小RNA(＜200nt)，具有操作步骤简单、重复性最好、产率较高的特点。核酸提取的成功与否、提取质量的好坏对后续实验起着至关重要的作用。使用TRIzol试剂提取总RNA，对总RNA中包含的部分小RNA进行研究，该方法的缺点是总RNA中microRNA的比例较小，同时由于mRNA的干扰，会导致后续反转录和RealTime PCR实验效率很低，很难获得理想的实验结果，且结果不可靠。百奥莱博在探索miRNA分子功能的过程中开发的全血miRNA提取试剂盒，通过一步上柱即可获得纯度高达98%的不含大RNA的miRNA，而且可在45分钟内完成小RNA的提取。每150μL全血可获得~1μg的microRNA。
图例：应用全血miRNA提取试剂盒（MT0002）提取全血的microRNA。
泳道1-3：-80℃冻存一年的全血；
泳道4-6：新鲜抗凝全血。
| 组分 | 25T | 100T |
| miRNA Reagent A | 7.5mL | 30mL |
| miRNA Reagent B | 10mL | 40mL |
| miRNA吸附柱 | 25套 | 100套 |
| RNase-Free TE Buffer | 5mL | 5mL |
保存：室温，有效期2年。
miRNA Reagent A溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。
异丙醇、乙醇、75%异丙醇
- 向1.5mL EP管中加入300μL miRNA Reagent A。将150μL抗凝全血加入到上述300μL miRNA Reagent A中，立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置5min以充分裂解细胞。
- 向上述裂解完毕的裂解液中加入250μL miRNA Reagent B，上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5min，吸取550μL上清液，转移到新的1.5mL EP管中。
- 向上述溶液中加入200μL无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置5min。
- 13000rpm离心10min，转移700μL上清液到新的1.5mlEP管中。
- 向上述溶液中加入300μL异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
- 分两次将上述溶液倒入到miRNA吸附柱中，13000rpm离心1min，倒掉过滤液。
- 向吸附柱中加入700μL 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心1min，倒掉过滤液。
- 向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心1min，倒掉过滤液。
- 吸附柱13000rpm空离心2min，去掉残留的乙醇。
- 将吸附柱放入到新1.5mL EP管中，室温放置2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL RNase-Free TE Buffer，室温静置2min，13000rpm离心2min，洗脱产物即为提取的miRNA。（通常取3～5μL该产物，即可使用我司全血microRNA提取试剂盒进行反转录反应，货号：MT0006）。
- 本方法提取的小RNA，95％以上为小RNA（<200nt），有时会残留一些>200nt的RNA，通常残留的>200nt RNA不影响后续试验操作。
- 本试剂盒提取的小RNA由于不含mRNA等大分子量的RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。
- 使用本试剂盒提取的microRNA浓度通常在50ng/μl左右，取5～10μL即可用于电泳检测。取3～5μL即可用于我司miRNA反转录试剂盒进行反转录反应（货号：MT0006），通常使用我司优化的microRNA荧光定量PCR试剂盒(TaqMan探针法，货号：MTTxxxxx)。
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